我的账户 - 鹰生物科技,Eagle Biosciences,Inc.

来自 : 发布时间：2024-04-29

关键词:Eagle Biosciences,Inc.蛋白、抗体及相关试剂简介：我公司总代理,华东地区代理Eagle Biosciences,Inc.蛋白、抗体及相关试剂经营进口胎牛血清、细胞因子、ELISA试剂盒、细胞、抗体、生物试剂、耗材、培养基、一抗、二抗、其产品吸附均匀，吸附性好，空白值低，孔底透明度高，代做ELISA实验等。总代理,华东地区代理Eagle Biosciences,Inc.蛋白、抗体及相关试剂产品涉及分子生物学、细胞生物学、菌学、遗传学、生物化学、蛋白质学、细胞疗、临床应用等领域。总代理,华东地区代理范围内免费运输，如出现运输质量问题，我们可以包退换货。Eagle Biosciences,Inc.蛋白、抗体及相关试剂完善的库存及供应体系以及高效稳定的纯化技术，保证产品均能现货供应和产品质量的稳定性。名称： Eagle Biosciences,Inc.蛋白、抗体及相关试剂域名名:EagleBio【检验原理】试剂盒组成及试剂配制1.酶联板：一块(96孔)2.标准品(冻干品)：2瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml，盖好后静置10分钟以上，然后反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为1,600 pg/ml，将其稀释为400 pg/ml后，再做系列倍比稀释(注：不要直接在板中进行倍比稀释)，分别稀释成400 pg/ml，200 pg/ml，100 pg/ml，50 pg/ml，25 pg/ml，12.5 pg/ml，6.25 pg/ml，样品稀释液直接作为标准浓度0 pg/ml，临用前15分钟内配制。如配制200 pg/ml标准品：取0.5ml (不要少于0.5ml ) 400 pg/ml的上述标准品加入含有0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。3.样品稀释液：1×20ml。4.检测稀释液A：1×10ml。5.检测稀释液B：1×10ml。6.检测溶液A：1×120μl(1:100)临用前以检测稀释液A 1:100稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验需的总量配制(100μl/孔)，实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10μl检测溶液A加990μl检测稀释液A的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。7.检测溶液B：1×120μl/瓶(1:100)临用前以检测稀释液B 1:100稀释。稀释方法同检测溶液A。8.底物溶液：1×10ml/瓶。9.浓洗涤液：1×30ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。10.终止液：1×10ml/瓶(2N H2SO4)。11.覆膜：5张自备物品1. 酶标仪(建议参考仪器使用说明提前预热)2. 微量加液器及吸头，EP管3. 蒸馏水或去离子水，全新滤纸标本的采集及保存1.血清：全血标本请于室温放置2小时或4℃夜后于1000 x g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。2.血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2 - 8° C 1000 x g离心15分钟，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。3.其它生物标本：请1000 x g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。4.样本处理：血清或血浆标本稀释5,000倍。注：以上标本置4℃保存应小于1周，-20℃或-80℃均应密封保存，-20℃不应过1个月，-80℃不应过2个月；标本溶血会影响*后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。 操作步骤实验开始前，各试剂均应平衡至室温(试剂不能直接在37℃溶解)；试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。实验前应预测样品含量，如样品浓度过高时，应对样品进行稀释，以使稀释后的样品符合试剂盒的检测范围，计算时再乘以相应的稀释倍数。1.加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl，余孔分别加标准品或待测样品100μl，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃反应120分钟。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。2.弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加检测溶液A工作液 100μl(在使用前一小时内配制)，酶标板加上覆膜, 37℃反应60分钟。3.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，大约400μl/每孔，甩干(也可轻拍将孔内液体拍干)。4.每孔加检测溶液B工作液(同检测A工作液) 100μl，酶标板加上覆膜37℃反应60分钟。5.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干(也可轻拍将孔内液体拍干)。6.依序每孔加底物溶液90μl，酶标板加上覆膜37℃避光显色(30分钟内，此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度兰色，后3-4孔梯度不明显，即可终止)。7.依序每孔加终止溶液50μl，终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。8.用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度(OD值)。 在加终止液后立即进行检测。注：1. 试剂准备：有试剂都必须在使用前达到室温，使用后请立即按照说明书要求保存试剂。 实验操作中请使用一次性的吸头，避免交叉污染。2. 加样：加样或加试剂时，请注意在吸取标本 / 标准品，酶结合物或底物时，前一个孔与后一个孔加样之间的时间间隔如果太大，将会导致不同的 \"预孵育\"时间，从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。一次加样时间(包括标准品及有样品)好控制在10分钟内，如标本数量多，使用多道移液器加样。3. 孵育：为防止样品蒸发，试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内，酶标板加上盖或覆膜，以避免液体蒸发；洗板后应尽快进行下步操作，任何时侯都应避免酶标板处于干燥状态;同时应严格遵守给定的孵育时间和温度。4. 洗涤：洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在滤纸上充分拍干，勿将滤纸直接放入反应孔中吸水，同时要消除板底残留的液体和手指印，避免影响后的酶标仪读数。5. 试剂配制：Detection A及Detection B在使用前请手甩几下或少时离心处理，以使管壁或瓶盖的液体沉积到管底。标准品、检测溶液A工作液、检测溶液B工作液请依据需的量配置使用，并使用相应的稀释液配制，不能混淆。请确配置标准品及工作液，尽量不要微量配置(如吸取检测溶液A时，一次不要小于10μl)，以避免由于不准确稀释而造成的浓度误差；请勿重复使用已稀释过的标准品、检测溶液A工作液或检测溶液B工作液。6. 反应时间的控制：加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化(比如，每隔10分钟)，如颜色较深，请提前加入终止液终止反应，避免反应过强从而影响酶标仪光密度读数。7. 底物：底物请避光保存，在储存和温育时避免强光直接照射。建议检测样品时均设双孔测定，以保证检测结果的准确性。如标本中待测物质含量过高，请先稀释后再测定，计算时请后乘以稀释倍数。洗板方法1. 手工洗板方法：吸去(不可触及板壁)或甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几次；将的洗涤缓冲液至少0.3ml注入孔内，浸泡1-2分钟，根据需要，重复此过程数次。2. 自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中。计算以标准物的浓度为纵坐标(对数坐标)，OD值为横坐标(对数坐标)，在对数坐标纸上绘出标准曲线。使用制作曲线软件进行分析，如curve expert 1.3，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度，再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。◇ 注意事项：收集标本前必须清楚要检测的成份是否足够稳定。对收集后当天进行检测的标本，储存在4℃备用，如有特殊原因需要周期收集标本，将标本及时分装后放在-20℃或-70℃条件下保存。避免反复冻融。标本2-8℃可保存48小时，-20℃可保存1个月。-70度可保存6个月。部分标本需添加抑肽酶。◇ 液体类标本标本必须为液体，不含沉淀。包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清、组织匀浆等。1ml的全血可得到0.5ml的血清或血浆。每个标本量收集体积＝100ul×检测种类。◇ 血清：室温血液自然凝固10-20分钟后，离心20分钟左右(2000-3000转/分)。收集上清。如有沉淀形成，应再次离心。◇ 血浆：应根据试剂盒的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，加入10％(v/v)抗凝剂(0.1M柠檬酸钠或1% heparin 或2.0%EDTA.Na2)混合10-20分钟后，离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。如有沉淀形成，应再次离心。◇ 尿液、胸腹水、脑脊液：用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。如有沉淀形成，应再次离心。◇ 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。◇ 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，缓冲液中可加入1μg/L蛋白酶抑制剂或50U/ml的Aprotinin(抑肽酶)。用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清置于-20度或- 70度保存，如有必要，可以将样品浓缩干燥。分装后一份待检测，其余冷冻备用。寄标本时需注明以下情况：标本编号；2、测项目；3、是否做复孔；3、；4、实验后标本是否寄回 以上信息由企业自行提供，信息内容的真实性、准确性和合法性由相关企业负责，仪器仪表交易网对此不承担任何保证责任。 温馨提示：为规避购买风险，建议您在购买产品前务必确认供应商资质及产品质量。